Dialisis merupakan suatu metode yang digunakan untuk memisahkan biomolekul berukuran besar atau kecil melalui membran semipermeabel. Di dalam larutan, molekul-molekul kecil dapat melalui pori membran, namun molekul-molekul besar tidak dapat. Pada prinsipnya dialisis akan memisahkan suatu amilum atau starch yang terdiri dari dua molekul yang berukuran besar yaitu amilosa dengan BM 50.000 dan amilopektin dengan BM 1,0×106. Bila amilum ditambahkan air liur (amilase) maka molekul-molekulnya akan terhidrolisis manjadi maltosa dengan BM 360 dan glukosa. Amilosa merupakan suatu polimer linear yang terdiri dari unit-unit D-glukosa dalam ikatan ?-1,4 glukosida. Berbeda dengan amilopektin, amilosa merupakan suatu polisakarida yang bercabang dan terdiri dari unit-unit D-glukosa dalam ikatan ? 1,6.
Maltosa dapat diuji dengan benedict, starch, amilosa dan amilopektin diuji dengan iod. Iodium dengan pati dapat membentuk suatu ikatan kompleks yang berwarna biru. Larutan benedict merupakan larutan tembaga yang basa, bila direduksi oleh karbohidrat yang mempunyai gugus aldehid atau keton bebas akan membentuk kupri oksida. Pembentukan senyawa dapat dilihat pada pembentukan warna hasil reaksi.
Tujuan Percobaan
Percobaan ini bertujuan untuk memisahkan molekul-molekul pati atau starch menggunakan metode dialisis, menguji pengaruh penambahan amylase pada pati dan menguji keberadaan maltosa, pati, amilopektin, dan amilosa dengan uji benedict dan uji iod.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah pipet volumetrik, gelas piala, kantong dialisis, pipet tetes, tabung reaksi, penangas air, papan uji, gegep, pengaduk, tali kasur, kertas saring, dan corong. Bahan-bahan yang digunakan adalah larutan pati, akuades, larutan benedict, air liur, dan larutan iod.
Prosedur Percobaan
Dua kantong dialisis disiapkan dengan ukuran yang sama dan diberi label A dan B. Kantong berlabel A diisi dengan 2 ml larutan pati ditambah 1,5 ml akuades dan 1,5ml air liur (kontrol positif). Kantong B diisi dengan 2,5 ml larutan pati dan 2,5 ml akuades. Kedua kantong yang telah diikat rapat direndam ke dalam masing-masing larutan gelas piala yang berisi akuades. Setiap 10 menit masing-masing gelas piala diambil 8 tetes, lalu dilakukan uji benedict yang telah disiapkan dalam tabung reaksi 5 ml. Kemudian dipanaskan dalam penangas air kira-kira 5 menit dan diamati perubahan warnanya. Pada interval waktu yang sama dilakukan pula uji iodin. Uji ini dilakukan dengan mengambil 1 tetes larutan dan dimasukkan dalam papan uji. Kemudian ditetesi larutan iodin, diaduk dan diperhatikan perubahan warnanya.
Pembahasan
Hasil pengujian dialisis pati dengan menggunakan air liur, diperoleh bahwa uji iod memberikan hasil yang negatif di luar kantong dialisis, hal ini berarti bahwa di luar kantong dialisis sudah tidak ditemukan lagi adanya molekul pati, amilosa, dan amilopektin, namun hanya terdapat molekul maltosa atau glukosa yang terlihat dari hasil positif pada uji benedict yang terbukti dengan terbentuknya warna merah bata pada tabung reaksi yang telah dipanaskan. Maltosa yang diuji dengan benedict memberikan warna merah bata, sedangkan amilum yang diuji dengan iod akan memberikan kompleks warna biru-ungu. Warna merah bata yang terbentuk disebabkan oleh maltosa dan glukosa memiliki gugus aldehid yang bebas sehingga dapat mereduksi ion-ion tembaga (Cu) yang terdapat pada larutan benedict menjadi Cu2O yang berwarna merah bata. Penambahan air liur pada pati di awal sebelum proses dialisis berfungsi sebagai enzim yang akan mengkatalisis proses hidrolisa senyawa pati menjadi maltosa ataupun glukosa.
Percobaan dialisis pada pati dengan menggunakan kontrol, diperoleh hasil bahwa baik di luar maupun di dalam kantong dialisis dengan uji benedict tidak ditemukan adanya maltosa, terbukti dengan tidak adanya perubahan warna (tetap biru). Uji iod pada cairan di luar kantong juga menunjukkan hasil yang negatif, namun untuk cairan di dalam kantong, uji iod menunjukkan hsil yang positif. Hal yang menyebabkannya adalah karena tanpa enzim, pati susah untuk terhidrolisis menjadi komponen sakar-sakarnya, atau bisa juga waktu untuk dialisisnya kurang panjang, sehingga molekul-molekul pati belum seluruhnya dipecah menjadi molekul-molekul yang lebih kecil yaitu maltosa atau glukosa yang dilakukan oleh membran semipermeabel.
Hasil uji iod pada larutan larutan amilum adalah terbentuknya warna biru tua. Amilosa, yang tersusun atas 20% pati, daan unit-unit glukosa membentuk rantai lurus yang berikatan menurut 1,4 glikosida. Dalam larutan rantai ini berbentuk heliks (spiral) karena adanya ikatan dengan konfigurasi a pada setiap unit glukosa. Bentuk tabung dari molekul spiral ini yang menyebabkan amilosa dapat berikatan kompleks dengan molekul iodium yang masuk ke dalam tabung membentuk senyawa berwarna biru tua.
Kesimpulan
Setelah dilakukan uji pati dan benedict pada cairan di luar maupun di dalam kedua kantong dialisa, diperoleh untuk kantong dengan penambahan air liur, terdapat glukosa di luar maupun di dalam kantong, tetapi tidak terdapat pati di luar kantong. Untuk kantong tanpa penambahan air lir, diperoleh bahwa tidak ada glukosa maupun pati di luar kantong dialisa, sedangkan di dalam kantong hanya terdapat pati tanpa adanya molekul glukosa hasil hidrolisis pati. Uji iod pada cairan pati menghasilkan hasil positif dengan terbentuknya warna biru tua pada kompleks pati-iod.
Daftar Pustaka
Hart, H. 1983. Kimia Organik. Terjemahan Suminar Achmadi. Jakarta: Erlangga.
Girindra, A. 1993. Biokimia I. Jakarta: Gramedia
Lehninger, A.L. 1988. Dasar-Dasar Biokimia I. Terjemahan Maggy Thenawijaya. Jakarta: Erlangga
Filed under: Uncategorized
